Smoltifiserings gen
1 Formål
Vi har slått ut to gener i laks; ppargc1 og nka1b. Disse fisken har blitt sortert, pit tagget of finneklippet i en annen godkjenning (22082).Tidligare studier viser til at disse genene kan ha funksjon i gjellen under smoltifisering i laks. Men vi vet ikke hvilken funksjon de har. I denne studien skal vi lys-styre 30g parr (mutanter og kontroller i common garden), slik at fisken går igjennom smoltifisering. Efter simulert vinter (6 uker med 12:12 lysregime) kommer vi at ta ut gjelle biopsier av kontroll og mutanter 2,4,6 uker, slik at vi kan måle smoltifieringsgrad of effekt på gen ekspresjon uten å avlive fisken. Har lagt ved publisert metode for gjellebiopsi, denne metoden har brukt tidligare og vi kommer å ha med eksperter som har utført denne metoden tidligare. I tillegg vil vi avlive en del mutanter 4 og 8 uker etter simulert vinter, slik at vi kan måle effekt i plasma og andre organ som smoltifiserer (tarm og nyre).
2 Skadevirkninger
Når vi muterer nye gen eller vaksinerer mot nye proteiner i laks kan vi ikke garantere at vi ikke får uønskede effekter, enten i form av at genet/proteinet er viktig for andre prosesser enn smoltifsering. Vi vet fra andre arter at man kan både redigere mot de utvalgte genene/proteinene. Ved gjellebiopsi vil følge en utviklet metode som ikke skader fisken (Mccormick et al 1992, Canadian Journal of Fish. and Aquat Sci 50, 1992). Fiskene vil bli overvåket daglig, og dersom nedsatt velferd blir observert vil den aktuelle fisken bli avlivet i henhold til regelverket.
3 Forventet nytteverdi
Man vet ikke hvilke genetiske mekanismer som styr smoltifisering i laks. Dette forsøket kan avsløre noen av disse mekanismene. Behovet fro slik kunnskap er stort siden oppdrettsnæringen sliter med gode protokoller for smoltifisering i de nye systemene for oppdrett e.g. storsmolt produksjon of RAS produksjon,
4 Antall dyr og art
Totalt Atlantisk laks fordelt slik:
18 NKA1a mutanter + 40 kontroll fisk fordelt på to tanker
12 PPARGC1A mutanter + 30 kontroll fisk på to tanker
Totalt 110 fisk
5 Hvordan etterleve 3R
For å bestemme funksjonen til et gen/protein i en organisme er det nødvendig å gjøre funksjonelle studier in vivo. Det finnes ingen cellelinjer hos laks som kunne vært benyttet til formålet.
Vi skal ha "common garden" oppsett, dvs. muterte/kontroll fisk går i samme kar. Dermed trenger vi ikke duplikate/triplikate kar for hver behandling for å utelukke en effekt av karmiljøet, og antall individer blir redusert.
Vi har tidligere studert genredigert laks i detalj (Edvardsen et al., 2014; Wargelius et al., 2016; Kleppe et al., 2017; Kleppe et al., in prep.), og har foreløpig ikke observert noen negative effekter på fiskens velferd. Om noen mutasjoner likevel gir redusert velferd blir fisken avlivet.
Vi har slått ut to gener i laks; ppargc1 og nka1b. Disse fisken har blitt sortert, pit tagget of finneklippet i en annen godkjenning (22082).Tidligare studier viser til at disse genene kan ha funksjon i gjellen under smoltifisering i laks. Men vi vet ikke hvilken funksjon de har. I denne studien skal vi lys-styre 30g parr (mutanter og kontroller i common garden), slik at fisken går igjennom smoltifisering. Efter simulert vinter (6 uker med 12:12 lysregime) kommer vi at ta ut gjelle biopsier av kontroll og mutanter 2,4,6 uker, slik at vi kan måle smoltifieringsgrad of effekt på gen ekspresjon uten å avlive fisken. Har lagt ved publisert metode for gjellebiopsi, denne metoden har brukt tidligare og vi kommer å ha med eksperter som har utført denne metoden tidligare. I tillegg vil vi avlive en del mutanter 4 og 8 uker etter simulert vinter, slik at vi kan måle effekt i plasma og andre organ som smoltifiserer (tarm og nyre).
2 Skadevirkninger
Når vi muterer nye gen eller vaksinerer mot nye proteiner i laks kan vi ikke garantere at vi ikke får uønskede effekter, enten i form av at genet/proteinet er viktig for andre prosesser enn smoltifsering. Vi vet fra andre arter at man kan både redigere mot de utvalgte genene/proteinene. Ved gjellebiopsi vil følge en utviklet metode som ikke skader fisken (Mccormick et al 1992, Canadian Journal of Fish. and Aquat Sci 50, 1992). Fiskene vil bli overvåket daglig, og dersom nedsatt velferd blir observert vil den aktuelle fisken bli avlivet i henhold til regelverket.
3 Forventet nytteverdi
Man vet ikke hvilke genetiske mekanismer som styr smoltifisering i laks. Dette forsøket kan avsløre noen av disse mekanismene. Behovet fro slik kunnskap er stort siden oppdrettsnæringen sliter med gode protokoller for smoltifisering i de nye systemene for oppdrett e.g. storsmolt produksjon of RAS produksjon,
4 Antall dyr og art
Totalt Atlantisk laks fordelt slik:
18 NKA1a mutanter + 40 kontroll fisk fordelt på to tanker
12 PPARGC1A mutanter + 30 kontroll fisk på to tanker
Totalt 110 fisk
5 Hvordan etterleve 3R
For å bestemme funksjonen til et gen/protein i en organisme er det nødvendig å gjøre funksjonelle studier in vivo. Det finnes ingen cellelinjer hos laks som kunne vært benyttet til formålet.
Vi skal ha "common garden" oppsett, dvs. muterte/kontroll fisk går i samme kar. Dermed trenger vi ikke duplikate/triplikate kar for hver behandling for å utelukke en effekt av karmiljøet, og antall individer blir redusert.
Vi har tidligere studert genredigert laks i detalj (Edvardsen et al., 2014; Wargelius et al., 2016; Kleppe et al., 2017; Kleppe et al., in prep.), og har foreløpig ikke observert noen negative effekter på fiskens velferd. Om noen mutasjoner likevel gir redusert velferd blir fisken avlivet.