Avl av mus med allel for kondisjonelt uttrykk av karboksy-terminalt fragment av CTGF/CCN2
1. Formålet med dette prosjektet; er å undersøke funksjon til et karboksyterminalt fragment av "connective tissue growth factor" (CTGF/CCN2) in vivo.
3. Forventet nytterverdi: Tidligere analyser har vist at det i vev og i sirkulasjonen finnes mindre fragmenter av CTGF. In vitro forsøk i vårt laboratorium har vist at karboksyterminale fragmenter av CTGF er biologisk aktive. Vår hypotese er at CTGF/CCN2 utskilles som et inaktivt propetid som aktiveres ved proteolytisk spalting f.eks. av proteaser frisatt ved vevsskade. Transgene mus med hjertemuskel, eller nyre-spesifikk ekspresjon av full-lengde CTGF har også en meget subtil fenotype med minimal fibrose (tidligere prosjekter ved Senter for Komparativ Medisin; 3155/2011 og5100/2013 og litteratur). Hvorvidt dette skyldes at CTGF uttrykt i hjertet i liten grad blir aktivert, er uavklart. Vi ønsker derfor å etablere en ny transgen linje med kondisjonelt uttrykk av et karboksyterminalt fragment av CTGF (LSL-d34CTGF) for å avklare om dette fragmentet er mer biologisk aktivt enn full-lengde CTGF. Denne søknaden omfatter kun etablering og avl av den nye linjen, samt akuttforsøk (isolering av celler for verifisering av funksjonaliteten av det insatte DNA elementet).
2. Skadevirkninger: Denne stammen lages slik at det karbosylterminale fragmentet av CTGF ikke vil uttrykkes i fravær av Cre-recombinase (Cre-Lox systemet). Det er således ikke forventet noen fenotype i denne stammen.
4. Dyreart: mus, Antall: 528
5. 3R'er: LSL-d34CTGF stammen vil som følge av sin temporalt og spatielt kontrollerbare ekspresjon kunne brukes i flere studier, og representerer således en modell som av design reduserer og raffinerer forsøksmodellen. Replacement: se punkt 3, in vitro forsøk allerede gjort, in vivo må til for å avklare in vivo funksjon.
3. Forventet nytterverdi: Tidligere analyser har vist at det i vev og i sirkulasjonen finnes mindre fragmenter av CTGF. In vitro forsøk i vårt laboratorium har vist at karboksyterminale fragmenter av CTGF er biologisk aktive. Vår hypotese er at CTGF/CCN2 utskilles som et inaktivt propetid som aktiveres ved proteolytisk spalting f.eks. av proteaser frisatt ved vevsskade. Transgene mus med hjertemuskel, eller nyre-spesifikk ekspresjon av full-lengde CTGF har også en meget subtil fenotype med minimal fibrose (tidligere prosjekter ved Senter for Komparativ Medisin; 3155/2011 og5100/2013 og litteratur). Hvorvidt dette skyldes at CTGF uttrykt i hjertet i liten grad blir aktivert, er uavklart. Vi ønsker derfor å etablere en ny transgen linje med kondisjonelt uttrykk av et karboksyterminalt fragment av CTGF (LSL-d34CTGF) for å avklare om dette fragmentet er mer biologisk aktivt enn full-lengde CTGF. Denne søknaden omfatter kun etablering og avl av den nye linjen, samt akuttforsøk (isolering av celler for verifisering av funksjonaliteten av det insatte DNA elementet).
2. Skadevirkninger: Denne stammen lages slik at det karbosylterminale fragmentet av CTGF ikke vil uttrykkes i fravær av Cre-recombinase (Cre-Lox systemet). Det er således ikke forventet noen fenotype i denne stammen.
4. Dyreart: mus, Antall: 528
5. 3R'er: LSL-d34CTGF stammen vil som følge av sin temporalt og spatielt kontrollerbare ekspresjon kunne brukes i flere studier, og representerer således en modell som av design reduserer og raffinerer forsøksmodellen. Replacement: se punkt 3, in vitro forsøk allerede gjort, in vivo må til for å avklare in vivo funksjon.